Пинакотека Амброзиана расположена во дворце, построенном в 1603 г. для кардинала Федерико Борромео. Его же коллекции составили основу галереи. Экспозицию открывают любимые кардиналом Федерико венецианцы и художники миланской школы, целиком захваченные влиянием Леонардо да Винчи. На стенах зала 1 размещены «Поклонение волхвов»
Тициана и «Святое семейство со св. Анной» Бернардино Луини. В зале 2 — «Мадонна» Боттичелли, полиптих «Св. Христофор» Бартоломео Виварини, «Музыкант», приписываемый Леонардо да Винчи. По другому предположению, «Музыканта» написал Амброджо де Предис - миланский подражатель гения. Во всяком случае, «Даму с жемчугом» кисти Предиса также долгое время принимали за работу Леонардо. В зале 3 выставлены замечательные полотна местного художника Брамантино, в том числе его «Мадонна на троне со святыми». Представленные в зале 5 подготовительные картоны Рафаэля для фрески «Афинская школа» в станцах Ватикана (итал. stanze - комнаты) необыкновенно интересны не только с художественной точки зрения, но и как единственный сохранившийся образец больших картонов эпохи Ренессанса.
Другой главный экспонат Пинакотеки Амброзиана, знаменитую «Корзину фруктов» Караваджо, можно увидеть в зале 6.